lang=zh data-reactroot=headmeta charSet=utf-8me na=viewport contenwidth=device-width initial-scale=1title da-rct-hel=true【求助】sds-page胶蛋白收回方法 - 丁香园论坛设计
sds-page胶蛋白收回有没什么简便易行的方法,请各位高手赐教,不胜感激。
我的意图蛋白是70kd,能够正常的运用透析袋吗,我查找了半响,市面上的透析袋都没有截留这么高分子量的,别的假如把凝胶弄碎今后,最终用什么方法能把把凝胶和意图蛋白分隔呢?请高手赐教!!!!
1:你能够把它放入缓冲液后撵碎越碎越好!加热!使用分散使它出来,胶碾细了能够打针就行了,我还见过连考蓝都没脱掉就去免疫的呢!
2:也能够放在透析袋中,放入水平电泳槽电压100,电泳4-6小时,在中止电泳前反向电泳15分钟。这样蛋白就在透析袋里的缓冲液里,能够终究靠透析换缓冲液或浓缩
一块10*10的MINI胶,一次也能收回1mg蛋白或更多,条件是你的方针蛋白不要太杂
电洗脱得收率在70%左右。假如你不要活性,且是包括体(抗原)胶收回不需要复性,跑变性电泳就能够,只需你能跑成一条带就行,实际上粗纯的包容体能够直接用LOADING BUFFER煮溶上样
反向电泳我估量是确保蛋白质游离,不然或许都吸附在透析袋上,这是我的猜想,2句话,胶碾细了能够打针就行了!乃至带着胶打!
你假如意图蛋白的量还能够,也能够不考染,金属离子染色法,在坛子里也有!不必脱色也便利。
最终你把袋里的溶液浓缩一下ok了!(对了袋子的截流量主张仍是不要大过分子量的1/3)!