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  电泳毕御下胶后，用0.25mol/l的KCl染色３－５分钟后即可看到意图带（白色，可要细心辨认噢！）．

  用薄刀片当心切之，（若不确认，可在疑似意图带的上下各切一两条带）移入大平皿中；

  当心取出碎沫装入EP中，参加300-600微升（依据你的割胶巨细，准确度）

  这时就能够放松一下了，A:将分装好的EP管放入－２０度中冷冻至少15min(时刻能延伸，只需你不是很着急）B:然后取出室温消融（若急，则用温水浴＜５０度几分钟即可）．重复A－B操作，３到５次即可离心(12000g,10min)取上清.加福氏(com/incom)佐剂..进行免疫了（腹腔）．必要时能够在重复冻溶２次后取出20微升左右的上清处理电泳判定，以保证所割下的胶中含意图带蛋白的纯度（这对免疫很重要啊）．

  讨教我们，我已用了这样的解决办法按过程做了，但是上清跑电泳没看到条带，一起将上清测浓度是180微克每毫升，是不是阐明上清仍是有蛋白的呢？？？请问这到底是怎么回事啊！！！！！等免疫这步都等了三个月了，请您点拨！！

  据本版上有些人说，加强免疫，静脉注射的时分，聚丙酰胺的毒性会打死兔子。

  （1） SDS－PAGE：运用厚胶，设两个样品孔，一个为蛋白marker，另一为样品，电泳分离样品。

  （2）KCl染色：用预冷的0.25M KCl染色（预先放在4度冰箱中），意图条带会呈现白色条带，依据你现已跑过的考马斯亮蓝染色的方位能判别哪条带是你的意图条带，假如蛋白浓度高的线分钟就能够正常的看到意图条带，蛋白浓度低的话，要染时刻长一些，大约5-10分钟，假如太低，估量是看不到意图条带了。无法用此办法看到意图条带。那用该办法就不行了。

  留意：蛋白浓度底，意图条带色彩很浅，要在布景深色的时分才干看到（能够放在通明的玻璃板上操作），由于这种染色办法灵敏度比考马斯亮蓝染色低许多。

  （3）脱色：当看到意图条带时，可用一洁净的刀片切下意图蛋白地点的凝胶条带，将凝胶条放在蒸馏水里浸泡5～15min，直至无色通明。

  直接提取法：将无色通明的胶条从蒸馏水中取出称重，装入一准备好的1.5ml离心管中，用灭菌镊子夹碎（或在放入离心管之前用刀片切碎），再在管里参加3～5倍体积蛋白溶解液（1g胶参加3～5ml蛋白溶解液）， 4度冰箱过夜，其间振动3～4次。第二天先将离心管悄悄振动一下，12000rpm离心10min，取上清。SDS－PAGE检测。